ELISA實(shí)驗(yàn)中緩沖溶液等試劑的配置

　　一、常用試劑配制方法

　　包被緩沖液(0.05mol/L pH9.6 碳酸鹽緩沖液)?

　　稱取Na?CO? 1.59g、NaHCO? 2.93g，加蒸餾水溶解并定容至1000mL，調(diào)pH至9.6，4℃保存一周內(nèi)用完。

　　洗滌緩沖液(pH7.4 PBS-T)?

　　稱取NaCl 8.0g、KCl 0.2g、Na?HPO?·12H?O 3.58g、KH?PO? 0.27g，加蒸餾水溶解，加入0.5mL Tween-20，定容至1000mL，調(diào)pH至7.4，室溫保存。

　　樣本/抗體稀釋液?

　　含1% BSA的PBS緩沖液：1g BSA溶于100mL pH7.4的PBS中，4℃保存，避免樣本變性、減少非特異性吸附。

　　封閉液?

　　可選1%~5% BSA-PBS或5%脫脂奶粉-PBS，現(xiàn)配現(xiàn)用，覆蓋酶標(biāo)板未結(jié)合位點(diǎn)。

　　底物緩沖液(pH5.0 檸檬酸-磷酸緩沖液)?

　　A液：0.1mol/L檸檬酸21.01g定容至1000mL;B液：0.2mol/L Na?HPO?·12H?O 71.63g定容至1000mL。取A液24.3mL、B液25.7mL混合，加蒸餾水定容至100mL，調(diào)pH至5.0。

　　TMB顯色工作液?

　　取底物緩沖液9.9mL，加入1% TMB無水乙醇溶液0.1mL，再加入30% H?O? 10μL，臨用前配制、避光操作。

　　終止液(2mol/L H?SO?)?

　　量取178.3mL蒸餾水，緩慢逐滴加入21.7mL 98%濃硫酸，攪拌冷卻后使用。

　　二、通用配制注意事項(xiàng)

　　試劑純度?：使用分析純?cè)噭┖腿ルx子水，避免雜質(zhì)干擾反應(yīng)體系。

　　pH控制?：精準(zhǔn)校準(zhǔn)pH計(jì)，嚴(yán)格將各緩沖液pH控制在指定范圍，保障抗原抗體結(jié)合效率。

　　混勻操作?：配制過程充分?jǐn)嚢?，避免局部濃度偏差，做好配制記錄便于?shí)驗(yàn)溯源。

　　儲(chǔ)存要求?：多數(shù)緩沖液2~8℃冷藏，TMB顯色液、含脫脂奶粉的試劑需現(xiàn)配現(xiàn)用，防止變質(zhì)污染。

　　安全操作?：配制濃硫酸終止液時(shí)需將酸緩慢倒入水中，嚴(yán)禁反向操作，做好個(gè)人防護(hù)。

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