免疫親和柱在黃曲霉毒素檢測中的關(guān)鍵作用

　　AFT免疫親和柱適用于基質(zhì)復(fù)雜，要求低的樣品中黃曲霉毒素B1，B2，G1，G2檢測的凈化。可以進行TLC、HPLC、GC、LC-MS/MS、EIA的定量分析，適用于谷物，食品，飼料等的樣品凈化過程。

　　柱容量 約200ng 黃曲霉毒素

　　儲存條件 2-8℃冷藏保存，不可冷凍

　　1 用途

　　用于實驗室凈化樣品提取物以進行進一步分析

　　2 概要

　　黃曲霉毒素是谷類及其他農(nóng)作物常見的霉變菌，是由黃曲霉和寄生曲霉產(chǎn)生的一類低分子化合物。污染糧食、油料作物的種子，其中以花生、玉米易被污染，另外在小麥、高粱、巴西堅果、豆類和大米等重要糧食中也經(jīng)常被檢出。

　　黃曲霉毒素熱穩(wěn)定性很高，一旦產(chǎn)生便難以除去。對動物、植物和微生物具有很強的毒性，致癌力強，還能引起突變和導致畸形。

　　黃曲霉毒素作為肝癌的三大誘因之一，也是胃癌，腸癌等疾病的主要原因，對人類的健康構(gòu)成很大威脅。世界各國對食品，飼料中的黃曲霉毒素都有嚴格的標準。

　　3 原理

　　測定的基礎(chǔ)是抗原抗體反應(yīng)，免疫親和柱中含有和黃曲霉毒素抗體結(jié)合在一起的凝膠，樣品中的黃曲霉毒素經(jīng)過提取、過濾、稀釋，然后緩慢的通過黃曲霉免疫親和層析柱，在免疫親和柱內(nèi)黃曲霉毒素與抗體結(jié)合，其他的無關(guān)物質(zhì)不會結(jié)合而直接通過免疫親和柱，之后洗滌免疫親和柱沒有被結(jié)合的其他無關(guān)物質(zhì)。后加入甲醇將黃曲霉毒素釋放，然后注入到分析儀器中進行進一步的檢測。

　　4 提供的試劑

　　25支/盒免疫親和柱，規(guī)格：1ml/3ml

　　5 操作者應(yīng)注意事項

　　黃曲霉毒素對人體有害，應(yīng)戴手套操作。

　　使用過的玻璃容器及黃曲霉毒素溶液宜用5%濃度的次氯酸鈉溶液浸泡過夜。

　　不要使用過了有效日期的免疫親和柱。

　　親和柱于2-8℃冷藏保存，不可冷凍

　　使用前，免疫親和層析柱需回至室溫(22~25℃)

　　6 操作流程(符合GB/T 18979-2003國標方法)

　　粉碎好的樣品過20目篩并在取樣前混合，不立即分析的樣品應(yīng)放在冰箱中儲存。

　　稱取20g粉碎樣品及4g氯化鈉，加入100ml 70%甲醇/水。

　　高速均質(zhì)約2分鐘，或震蕩器震蕩約30分鐘，

　　過濾樣品至少10ml。

　　取10ml濾液加入20ml水，混合。

　　用玻璃纖維濾紙過濾至澄清，取15ml準備加入到免疫親和柱中過柱。

　　將10ml注射器連接于免疫親和柱上端。

　　處理好的樣品液15ml以1-2滴/秒的速度通過免疫親和柱，棄掉流出的液體。

　　加10ml水淋洗柱子兩次，棄掉流出的液體，

　　利用真空設(shè)備壓入空氣或用注射器吹干柱子中的水。

　　加入1ml甲醇緩慢洗脫，流速約為2-3秒每滴。

　　收集全部洗脫液于干凈的比色皿或其他容器中用于檢測。

　　安全防護?

　　操作需戴手套口罩，廢液用5%次氯酸鈉處理?

　　8 液相色譜測定條件

　　激發(fā)/發(fā)射波長：360nm/440nm

　　流動相：甲醇-水(45+55)

　　流速：0.8mL/min

　　進樣量：20ul

　　柱溫：30°C

　　反應(yīng)時間：10min

　　用進樣器吸取20µL黃曲霉毒素標準工作液注入HPLC

　　色譜儀，在上述色譜條件下測定標準溶液的響

　　應(yīng)值(峰高或峰面積)，得到黃曲霉毒素B1、B2、

　　應(yīng)用場景

　　食品檢測?

　　乳粉、堅果、香料等中黃曲霉毒素凈化?

　　法規(guī)標準?

　　滿足中國GB 5413.37、歐盟EC No 1881/2006等要求?

　　五、注意事項

　　開封后需平衡至室溫(22-25℃)使用?

　　過柱后建議結(jié)合HPLC或LC-MS/MS檢測?

　　(注：不同廠家產(chǎn)品可能存在參數(shù)差異，建議參照具體說明書?)

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